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答:您可以在实验前一天使用无血清培养基饥饿细胞,第二天成管效果会更好,也要注意细胞的密度,您可以将模基生物提供的血管生成实验说明书作为参考。
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2. 为什么我用DMEM可以培养细胞,但却做不了成管?
答:成管时间主要取决于培养基中血管生成因子的浓度,ECM完全培养基或肿瘤条件培养基中血管生成因子较丰富,容易成管,我们推荐使用这类培养基进行操作。
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答:成管时间与细胞状态密切相关。细胞状态好时,2-3小时开始成管,细胞状态较差时,可能18-24h成管;如果使用原代内皮细胞而非永生化细胞,开始成管的时间会延迟几个小时。我们建议您首次实验时,每4个小时观察一次。
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4. 为什么我铺的基质胶液面总是不平?或者有气泡?
答:首先,您在铺胶时需要尽可能垂直加入,当刚加胶时出现明显的气泡,可使用吸头轻触戳破,后续摇平即可。
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5. 模基生物基质胶能诱导ES/iPS细胞分化吗?
答:诱导分化并不取决于基质胶,这是由培养基定向分化完成的。模基生物干细胞专用基质胶(货号:082777/082775)可以维持干细胞培养,保持干性,有利于后续的定向分化。
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6. 小室放入24孔板时,产生了气泡,是否对实验有影响?
答:有。下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用将会减弱,可以通过将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板中。
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7. 铺细胞前,如果有液体穿过小室进入下室会对实验产生什么影响?
答:若存在该现象,实验结果可能存在误差,建议每次操作时都准备复孔。
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8. 怎么避免铺胶时产生气泡?若产生气泡要怎么处理?
答:由经验决定,可以不用刻意避免,若铺胶时若产生气泡,可用枪头戳破,铺胶以后左右摇摆使胶铺平。
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答:当基质胶被稀释到小于3mg/mL时,无法清晰地观察到凝胶现象,只要在37℃环境进行孵育,基质胶会在底层形成薄层凝胶。
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10. 我进行一次侵袭实验需要需要准备多少基质胶?
答:根据测试数量决定。对于24孔板的transwell小室,我们建议使用将标准浓度基质胶进行1:8稀释后,以60μL稀释液进行铺胶,我们对于标准型金牌基质胶(082704)、标准型无酚红金牌基质胶(082706)均进行了侵袭验证,提供了不同稀释比例下的肿瘤细胞侵袭效果,可以作为您实验的参考意见。
不同的细胞系需要不同的包被浓度才能达到预期的效果。您需要优化细胞密度和侵袭时间等来满足实验需求。