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答:答:无酚红基质胶没有颜色干扰,更适用于需要染色分析的相关应用;含酚红基质胶中的酚红可以作为pH指示剂,被稀释于大体积培养液后,产品本身的指示作用强度降低。另外,酚红有类似雌激素的效果,在对激素敏感的相关研究中,建议使用无酚红基质胶。
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答:融化后的基质胶,在4℃条件下呈液态。随着温度从低温逐步升高,超过8℃后,基质胶中以层粘连蛋白为核心、IV型胶原蛋白为框架聚合形成分隔的交联网状结构,能够与基质胶中的其他各类蛋白相互交联,最终形成固体支架,即基底膜。基质胶可以由使用者控制基底膜的厚度进行多类实验操作。目前基质胶的主要应用领域有类器官研究领域、动物成瘤领域、干细胞研究领域、代谢及毒理研究等。
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答:模基生物基质胶是从富含胞外基质蛋白的小鼠肿瘤中提取出的天然基底膜基质。主要依次为层粘连蛋白(Laminin)、IV型胶原蛋白(Col-IV)、巢蛋白(Entactin)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan sulphate proteoglycans)及多种细胞因子,如类胰岛素生长因子(IGF-1)、转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)等。产品溶解于高糖DMEM中,且非定制产品均添加了50μg/mL庆大霉素。
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4. Transwell实验中显微镜下视野不清晰,背景灰暗偏蓝紫色,背景似有胶状反光物质是为什么?
答:背景灰暗偏蓝紫色:可能是结晶紫染色后,PBS涮洗程度不够。
背景似有胶状反光物质:有两种可能,1、结晶紫染色完毕后没用棉签擦拭上室或擦拭不完全;2、稀释基质胶时,基质胶温度过高或用于稀释的培养基未做预冷处理。基质胶稀释不均匀。
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5. 细胞侵袭实验与细胞迁移实验结果没有太大的区别是实验失败了吗?
答:肿瘤细胞的侵袭和迁移同属于肿瘤细胞恶性行为,二者有联系却也有区别。侵袭是转移的一个重要部分。高转移能力的细胞一般都有高侵袭能力,而高侵袭能力的细胞不一定具有高转移能力。因此该实验细胞或许是拥有高侵袭能力的细胞而其转移能力并不高。故实验结果可能出现侵袭实验与迁移实验结果相近的现象。甚至可能出现侵袭实验染色细胞略高于迁移实验的现象(实验的系统误差)。属于正常现象。
当然,也可能是在进行基底膜水化时基质胶薄膜被冲破了,导致基质胶的薄膜效果丧失。侵袭实验效果与迁移实验效果相近。
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6. 气管类器官原代建立时杂细胞与气管碎片极多,有什么方法可以将它们除去呢?可以使用更小孔径的滤网吗?
答:气管类器官原代建立时不可避免的会有许多的杂细胞和气管碎片。若是红细胞,在种板前在细胞悬液中加入红细胞裂解液后离心,重悬即可除去。而气管碎片则在类器官传代时便可去除。不建议用更小孔径的滤网过滤细胞悬液,过小的滤网孔径在阻挡杂细胞与气管碎片时也会阻挡目标细胞团。进行种板的细胞若是太小或是为单细胞,则类器官成活率低、生长慢。据过往实验培养效果,100μm为该步骤滤网最佳孔径。
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7. 气管类器官培养的是哪种细胞?实验时取用的小鼠气管组织这么小,有足够的成体干细胞吗?
答:气管类器官培养的是气管上皮细胞,原代建立实验收集的气管上皮细胞比较少只能支持48孔板种板3~6孔左右。
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答:气管原代建立难以保证细胞的纯度,经过传代后类器官的纯度会增加
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答:需要避免的并非类器官分化,而是类器官的不定向分化。若是在还需扩增时期类器官提前分化了,则类器官生长速度将大幅减慢,若是分化时不按定向目标分化,培养出的类器官可能并非目标类器官。则继续培养就没了意义。这也是我们为什么必须要选择优秀基质胶。
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10. 若无可一边培养类器官一边实时观察细胞生长情况的显微镜,如何确保每次观察比对的都是同一个视野?
答:可以选择优秀的视野,并在该视野下用标记笔在孔板底部做上标记,往后观察只需找到这个标记调节焦距即可。