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1. Mogengel&ABW 基底膜基质的最低成胶浓度是多少?
答:不同的实验目的需要不同的 Mogengel&ABW 基底膜基质浓度,用户应该根据具体的实验需求确定。ABW® Matrigengel 基底膜基质最低成胶浓度为 3 mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释,不同批次间的 ABW® Matrigengel 基底膜基质浓度有差异,应该根据最终工作浓度 (mg/mL)算出需要加入的稀释液体(如PBS或无血清培养基)的量。用于体内研究的 Mogengel&ABW基底膜基质,为了避免成胶不完全,最终工作浓度不应低于 4 mg/mL。
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2. 做细胞侵袭实验,需要使用多少Mogengel&ABW 基底膜基质进行包被?
答:包被24孔通透性支持物,推荐每孔使用0.1 mL (浓度200-300 μg/mL) ,Mogengel&ABW 基底膜基质货号为082704。
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3. 进行内皮管形成实验,应该选用多大浓度的 Mogengel&ABW 基底膜基质呢?
答:进行该实验,Mogengel&ABW 基底膜基质最低浓度应不低于10mg/mL。
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4. 哪些情况下应该选用薄胶?什么时候用厚胶呢? 3D培养有哪些应用?
答:薄胶主要用于辅助细胞贴壁,有利于细胞增殖。如原代细胞培养,需要一层薄薄的蛋白层辅助,就可以选用薄胶;厚胶主要用于3D细胞培养,如大鼠主动脉组织分化为毛细血管样结构(Ring Assay),以及进行细胞侵袭实验等;3D细胞培养实验,主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构,如生物组织等。
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5. Mogengel&ABW 基底膜基质包被过的培养皿可以储存多长时间呢?
答:推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在Mogengel&ABW基底膜基质中的细胞。
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6. 如何从Mogengel&ABW基底膜基质中收获细胞?
答:推荐使用中性蛋白酶或细胞回收解决方案来收获培养在Mogengel&ABW基底膜基质中的细胞。
中性蛋白酶相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液,不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞,使用中性蛋白酶不会产生损伤。此外中性蛋白酶也可以用于组织分离。
对于代谢研究和RNA抽提,建议在4℃使用细胞回收解决方案进行非酶反应的细胞收获。因为Mogengel&ABW基底膜基质中含有痕量的RNA,进行RNA分析时,应设一个Mogengel&ABW基底膜基质(不接种细胞)的对照组。
其它从Mogengel&ABW基底膜基质中收获细胞的方法:
降低温度至4℃-6℃使Mogengel&ABW基底膜基质解聚,需要一定的时间并且仅适合一部分应用。
离心以破坏Mogengel&ABW基底膜基质结构。
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7. 什么情况下,需要使用无酚红Mogengel&ABW基底膜基质?
答:对于涉及颜色检测的实验,推荐使用无酚红MG&ABW基质胶,如使用荧光染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养,也需使用无酚红MG&ABW基质胶。
此外,酚红和非甾体雌激素结构类似,有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。
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8. Mogengel&ABW基底膜基质会快速聚合吗?
答:Mogengel&ABW基底膜基质在 22℃至 35℃时会快速聚合成胶。
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9. 使用Mogengel&ABW基底膜基质时,需要将移液器吸头和离心管预冷吗?
答:是的。因为Mogengel&ABW基底膜基质在高于10℃的条件下即会开始成胶,我们推荐操作基底膜基质时使用预冷的移液管、吸头和离心管。
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10. Mogengel&ABW高浓度基底膜基质用于哪些实验?
答:Mogengel&ABW高浓度基底膜基质可适用于体内应用研究,如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使Mogengel&ABW基底膜基质注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位,便于用于原位分析和/或以后的切除。