模基生物人乳腺类器官试剂盒

产品描述

模基生物人乳腺类器官试剂盒是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维持人正常乳腺类器官。 乳腺类器官能够在体外增殖分化形成完整的乳腺导管和乳腺腺泡结构，为研究正常乳腺干细胞及祖细胞、乳腺结构的发育机制提供了良好的模型。

产品信息

其他自备材料和试剂

乳腺类器官完全培养基的制备

使用无菌操作技术配制乳腺类器官完全培养基。以下是配制 10mL 完全培养基的示例，如所需量不同，可相应调整用量。

1. 冰上解冻乳腺类器官培养因子B (50x) 和乳腺类器官培养因子C(250x)。

注意： 解冻后，建议将乳腺类器官培养因子B (50x)和乳腺类器官培养因子C (250x)分别分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将 200uL乳腺类器官培养因子B (50x)，40uL 乳腺类器官培养因子C(250x) 加至9.76mL乳腺类器官培养基础培养基中，充分混合，配制成 10mL乳腺类器官完全培养基。

注意：配制后的乳腺类器官完全培养基可在 2-8°C 储存，建议在两周内使用。乳腺类器官培养因子B (50x)内含有细菌及真菌抗生素。

乳腺类器官的原代培养

注意：涉及主要人体组织材料的研究必须遵循所有相关的机构和政府法规。在收集主要人体组织材料之前，必须获得所有受试者的知情同意。

Ø 原代人乳腺类器官的建立

1.用离心管将人正常乳腺组织收集在冰冷的原发组织储存溶液中。将组织样品保持在4℃，直到分离开始。

2.评估获得的乳腺组织是否完全由上皮组成。 如果存在脂肪或肌肉组织，请在解剖显微镜下使用手术剪刀或手术刀和镊子尽可能多地去除这些非上皮成分。如果没有脂肪或肌肉组织，请立即继续下一步。

3.用上皮类器官基础培养基或DPBS冲洗组织两次。

4.使用手术剪刀或手术刀将组织切碎成1-3 mm³的小碎片，置于细胞培养皿中。

5.在37℃下用3-5mL正常组织消化溶液在15mL离心管中消化组织片段，消化时间可从30 min到1.5 h不等。仔细监测消化过程，可适当吹打取上清观察消化程度。当大多数组织片段能够通过1mL移液器吸头时，消化过程即完成。

6.将FBS加入组织消化混合物中，最终浓度为2%，并使用100μm细胞过滤器过滤。

7.收集并在4°C下以250g离心过滤的细胞3min。  在可见的红色沉淀的情况下，吸入上清液，并使用2mL红细胞裂解液重悬沉淀，在室温下裂解红细胞1min，并在4°C下以250g离心3min。

8.吸出上清液并将沉淀重悬于基础培养基中，在4°C下以250g离心3min，再次重复此步骤。

9.吸出上清液并将沉淀重悬于基质胶中。基质胶应保存在冰上以防止其凝固。尽快进行该过程。使用的基质胶的量取决于颗粒的大小。大约10，000个细胞应接种在25 μ L基质胶中。

10.不要过度稀释基质胶（基质胶比例应>70%（基质胶体积/总体积）），因为这可能会抑制固体液滴的正确形成。将含有类器官的基质胶铺在24孔细胞培养板的底部，每个液滴围绕孔中心约30 μL。

注意：一旦类器官重悬于基质胶中，尽快进行种板，因为基质胶可能会在试管或移液器吸头中凝固。不要让基质颗粒接触管壁。

11.将培养板放入37℃和5% CO₂的培养箱中15-25min，让基质凝胶固化。

12.准备所需量的乳腺类器官完全培养基。

13.一旦基质胶滴凝固（15-25min），打开板并小心地向每个孔中加入500 μL乳腺类器官完全培养基。

注意：不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏已凝固结构。

14.将培养板置于37 ℃和5% CO₂的恒温培养箱中。

15.每隔3-4天更换一次培养基，小心地从孔中吸出培养基，并用新鲜的预热的类器官完全培养基代替它。

16.密切监测类器官生长状态，理想情况下，人正常乳腺类器官应在 7-10 天内建成。