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模基生物人结肠类器官培养培养基套装Plus(扩增)
模基生物人结肠类器官培养基套装(扩增)是一款用于扩增人结肠类器官的完全培养基,扩增时的人结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成。结肠类器官在自我更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是人结肠研究的理想体外模型。
  • 货号-规格/价格:
    MA-0817H001HLP(¥14318)
    MA-0817H001HSP(¥5012)
  • 产品品牌:
    模基生物
  • 储存条件/方式:
    -20℃/冰箱
  • 运输条件/方式:
    -20℃/干冰
产品详情
Product Details


模基生物人结肠类器官培养基套装(扩增)

产品描述

模基生物人结肠类器官培养基套装(扩增)是一款用于扩增人结肠类器官的完全培养基扩增时的人结肠类器官主要由结肠干细胞和结肠祖细胞组成结肠类器官在自我更新和分化能力、组织结构、细胞类型和功能方面,重现了体内结肠上皮的特征,因此是人结肠研究的理想体外模型。

产品信息

产品名称 

产品货号

规格

储存/运输 

保质期

人结肠类器官培养基套装(扩增)Plus

MA-0817H001DLP 

500ml

-20 

24 个月 

MA-0817H001DLP 

100ml

其他自备材料和试剂

产品名称

产品货号

模基生物金牌基质胶

082701/082703/082755

上皮类器官基础培养基

MB-0818L07

类器官培养润洗液

MB-0818L03L/S

模基生物基质胶分装预冷盒

AB-YL1005

Fetal Bovine Serum (FBS)

-

EDTA (0.5 M, pH 8.0)

-

DPBS (1X), 液体,不含钙和镁

-

70 μm细胞滤网

-

人结肠类器官完全培养基使用说明 

1.收到类器官培养基后,将培养基置于四度冰箱进行解冻;

2.将解冻后培养基上下颠倒充分混匀,在无菌的生物安全柜或超净工作台中将培养基进行分装,推荐分装成 10ml 规格;

3.将分装后的培养基储存于-20,使用时拿出分装后的培养基解冻后即可使用。

注意:

² 分装后的类器官培养基需储存于-20,有效期两年,注意避免反复冻融;

² 解冻后类器官完全培养基可在 4°C 储存,建议在两周内使用;

² 类器官培养基中内含有细菌及真菌抗生素。

人结肠类器官的建立与传代培养

注意:涉及原代人体组织材料的研究必须遵守所有相关的机构和政府法规。在收集主要人体组织材料之前,必须获得所有受试者的知情同意。

Ø 原代人结肠类器官的建立

1.取样:使用离心管将原代人结肠组织收集在冰冷的原代组织储存液中,将组织样本保存在 4°C,直到开始

离。

2.清洗:将组织样本转移至装有预冷DPBS缓冲液的培养皿中,肠腔面朝上,一只手使用手术镊夹住肠组织一端,另一只手使用手术刀片轻轻刮去肠腔表面粘液或残留的粪便,接着将结肠组织置于新的含 DPBS 的培养皿中清洗2-3 将清洗后的肠组织剪碎至2-5 mm宽,随后转移至50ml离心管中,剧烈震荡30s (垂直上下震荡90 次一上一下算一次,约 1s 三次) 弃上清,重复3次。

3.消化:加入30 mLDPBS 溶液中再加入150 μL 0.5M EDTA,至EDTA终浓度为2.5 mM。置4摇床上,80rpm,消化 60 min

4.清洗:消化完成后,静置待肠段沉淀,弃上清。加入预冷DPBS,轻柔摇匀,静置后弃上清,重复2次以去除 EDTA

5.重悬:加入30 mL预冷的含0.1%BSADPBS,涡旋30s,取上清70μm滤网过滤,收集穿过滤网的组织悬液,记为馏分1。重复收集2次,记为馏分2和馏分3

6.收集:300g 离心力 4离心3min

7.计数:弃上清,根据沉淀量分别使用0.1%BSADPBS重悬组织沉淀,取20μL 悬液进行镜检和隐窝计数,计数完成后吸取包含所需隐窝量的悬液,300g 离心力 4离心3min,弃上清后置于冰上。

8.用适量的基质胶重悬组织沉淀,推荐重悬密度为每10μL 基质胶悬液包含100200个隐窝,重悬后置于冰上,重悬时间不超过30s以避免基质胶过早凝固。

注意:基质胶稀释比例应在70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

9.将基质胶和组织细胞的混合悬液接种至24孔板底部正中央,每孔30 μL左右,避免悬液接触孔板侧壁。

注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。 

10.将接种完成后的培养板至于37二氧化碳恒温培养箱中,孵育30 min左右待基质胶凝固。

11.待基质胶完全凝固后,沿壁缓慢加入已配制好的人结肠类器官完全培养基(扩增)24孔板每孔加入500μL,避免破坏已凝固结构。

12.24孔板置于 37二氧化碳培养箱中培养。

13.2~3天更换一次培养基,更换培养基时应避免破坏基质胶。密切监测类器官生长状态,理想情况下,人结肠类器官应在57天内建成。

Ø 人结肠类器官的传代培养和分化

1.  用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官,并将结肠类器官和培养基悬液转移至经过润洗液润洗的 1.5 mL EP 管中。

2.  用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液,多次吹打使得类器官与基质胶分离。

3.  300×g4离心 3 min,弃上清,用经过润洗液润洗的枪头加入 200 μL 类器官消化液并充分混匀,37条件下消化 1- 3 min,消化结束后加入 1 mL 上皮类器官基础培养基吹打混匀。

4.  300×g4离心 3 min,弃上清,再次加入 1 mL 上皮类器官基础培养基并混匀。

5.  300×g4再次离心 3min,弃上清后置于冰上。

6.  用适量的基质胶重悬类器官沉淀,重悬后置于冰上,重悬时间不超过 30 s 以避免基质胶过早凝固。

注意:基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7.  将基质胶和类器官的混合悬液点入 24 孔板底部正中央,避免悬液接触孔板侧壁,每孔 30 μL 左右。

注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

8.  将接种完成后的培养板至于 37二氧化碳恒温培养箱中,孵育 30 min 左右待基质胶凝固后取出。

9.  配制人结肠类器官扩增培养基。

10. 待基质胶完全凝固后,沿孔壁加入提前预热的人结肠类器官扩增培养基,24孔板每孔 500μL

11. 24孔板置于 37二氧化碳培养箱中培养,待新长出的类器官直径超过 100 μm 后可进行分化实验。

12. 分化前需要吸去24孔板培养孔中的人结肠类器官扩增培养基,并加入500 μL 提前配制的人结肠类器官分化培养基,分化通常需要 4 d 以上时间,分化期间每隔 2 d 更换一次分化培养基,分化完成后可进行后续实验。



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