肠隐窝是小肠上皮绒毛根部下陷至固有层形成的管腺体，开口于相邻绒毛间。上皮层向固有层内陷形成的无数隐窝中存在着维持上皮细胞不断更新换代的干细胞，通过增值分化维持小肠稳态修复上皮损伤。
2009年荷兰的Toshiro Sato ，Robert G.Vries等人分离小肠隐窝体外模拟肠上皮的增值分化过程，建立了既可长期培养肠上皮细胞又维持了细胞原始分化能力的新型培养方法。为干细胞研究、疾病模型建立、再生药物研究开启了新的大门。
作为各种研究的基础—小鼠小肠类器官培养却成了许多学者老师们头疼的问题，操作难、培养不易、隐窝太少等等都妨碍着许多学者老师在各自擅长领域大展身手。经过两次实验直播以及直播后的交流，相信大家对我们的培养方式有了一定的了解。正所谓工欲善其事必先利其器，基质胶在类器官培养实验中起着着至关重要的作用。
为了让大家了解基质胶，选择合适、优秀的基质胶。今天我们为大家带来了模基基质胶批次202223706ZWD、20223708ZWD以及进口C品牌批次2010005的对比实验。
一.
样本信息
模基基质胶
| 名称 | 货号 | 批号 | 浓度（mg/mL） |
| 类器官专用基质胶 |
082755/0827555 |
20223708ZWD | 8.78 |
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类器官专用基质胶 |
082755/0827555 |
20223706ZWD |
9.33 |
对照组
| 厂家 | 产品名称 | 货号 | 批号 |
| c品牌 | 高浓度无酚红基质胶 | 356231 |
2010005
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二.
实验流程
1.培养材料
（1）试剂：MatrigengeL Matrix、小鼠胆管类器官培养试剂盒、类器官消化液、润洗液、基础培养基。
（2）耗材：48孔细胞培养板、离心管（规格为1.5mL）、移液器（规格为10μL、200μL、1000μL和5000μL）、无菌吸头（规格为10μL、200μL和1000μL）、40μm细胞过滤器。
2.实验前准备
（1）MatrigengeL Matrix 4℃化冻
（2）小鼠胆管类器官完全培养基的制备：将200μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement B (50x)，40μL Mouse Liver Ductal Organoid Supplement C(250x)加至9.76mL Mouse Liver Ductal Organoid Basal Medium中，充分混合，配制成10mL小鼠胆管类器官完全培养基，室温平衡，可在2-8°C储存，建议在两周内使用。
3.类器官培养
以下操作吹打细胞的吸头均需用润洗液润洗后使用：
（1）小鼠胆管类器官收集：保留原有培养液，用移液管吸头尖端轻轻刮下吹打细胞外基质和小鼠胆管类器官混合物，转移至1.5mL离心管中，吹打5~10次，使小鼠胆管类器官和细胞外基质分离，300g离心3分钟。
（2）小鼠胆管类器官消化：离心后，去除上清液，分别加入200μL类器官消化液，吹打混匀后置于37℃培养箱中消化。
（3）小鼠胆管类器官终止消化：类器官消化时间5分钟，吹打混匀，加入1mL基础培养基吹打混匀以终止消化反应，300g离心3分钟。
（4）细胞过滤：加入1mL基础培养基重悬细胞沉淀，用40μm细胞筛网过滤细胞悬液，收集滤液至新的离心管中，300g离心3分钟。
（5）小鼠胆管类器官清洗：离心后用基础培养基清洗1次收集至同一个离心管中，离心以去除残留的消化液。
（6）细胞计数：用1mL基础培养基重悬细胞，取18μL细胞悬液与2μL台盼蓝混匀，取10μL混合液加至血球计数板中，显微镜下观察计数,300g离心3分钟，弃上清。
（7）基质胶3D包裹：根据密度加入适量基础培养基重悬细胞，取5 μL细胞悬液至新的离心管中，每组分别与18μL不同的细胞外基质冰上混匀（注意，混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。
（8）种板培养：用移液器吸取10μL细胞外基质和细胞的混合液移至培养板孔中，混合悬液须点在培养孔底部中央位置，其铺开后不可接触培养孔侧壁，平行2孔。将培养板放入37℃，在5%二氧化碳细胞培养箱中孵育20分钟，待细胞外基质凝固至不再流动后，沿孔壁缓缓加入250 μL完全培养基。
（9）持续培养：将细胞培养板放入培养箱中进行培养，每1天于倒置显微镜下观察小鼠胆管类器官的生长状态，于倒置显微镜下拍照，记录多个视野中类器官的形态和分布。
三.
实验结果
四.
实验分析
模基基质胶与Brand C基质胶均有良好的培养效果，两组实验胆管类器官均无明显贴壁现象。其中20224105CWD的培养效果略胜一筹。
模基生物基质胶经过严格的质检验证，具备安全性高、浓度多样性、批次稳定性好、低内毒素、无污染。在购买模基产品时，根据用户个性化的需求对用户进行最佳产品、货号的推荐，以便用户获得性价比最高、效果最优的产品。
五.
参考资料
1.胆管“类器官”修复受损肝脏试验成功——首证实验室培养的细胞可助器官移植（中国科学院官网）
2.Cholangiocyte organoids can repair bile ducts after transplantation in the human liver（science官网）
