“道生一，一生二，二生三，三生万物”。这是出自老子《道德经》第四十二章的一句话，它道尽了干细胞的玄妙。那什么是“生万物之道呢”？对于干细胞来说，要做到“生万物”，合适的诱导分化是关键。如21年德国杜赛尔多夫海因里希海涅大学的Jay Gopalakrishnan团队用醋酸视黄醇诱导的眼睛类器官[1]；维也纳奥地利科学院科研团队诱导的心脏类器官[2]。而在进行诱导分化“转化万物”之前，干细胞的“一生二，二生三”也是不可忽视的。如何在“转化万物”前扩增制备足够数量的干细胞而又不使其经受刺激“提前转化”呢？那当然就是选择一款性能优异、诱导干扰极低的基质胶啦！
本周我们对Cat.No.082777/0827775基质胶进行了ES细胞培养测评。让我们一起看看怎么培养ES细胞以及最终效果吧！
一.
样本信息
模基基质胶
| 名称 | 货号 | 批号 |
浓度（mg/mL） |
| 干细胞专用金牌基质胶 | 082777/0827775 |
20223816AWD |
8.49 |
对照组
| 厂家 | 产品名称 | 货号 | 批号 |
| Brand C | 干细胞专用基质胶 | 354277 | 2045004 |
二.
实验流程
1.培养材料
试剂：ES细胞、MatrigengeL Matrix、10mM ROCK 抑制剂（Y-27632，工作浓度10μM）；DMEM /F12培养基；mTeSR1/E8培养基；Accutase/EDTA解离剂；PBS(D-PBS)；
材料：无菌枪头；6 孔板；无菌EP管等耗材；可根据实验设计自行调整。
2.培养预备
（1）配置基质胶混合液
a、将基质胶置冰上在4℃冰箱过夜解冻；
b、4℃预冷无菌离心管、无菌枪头、DMEM基础培养基等接触基质胶的耗材或试剂；
c、将Matrigengel（Cat.No.0827775）按1:80 - 1:100的比例稀释，对于ES细胞培养，建议涂布浓度约为0.013mg/cm²。
例如，将12.5mg/mL的Matrigengel使用冰冷的DMEM/F12，1:100稀释后，每个6孔板的涂布量为1mL。
（2）制作基质胶涂层
a、按照0.013mg/cm²的量加入Matrigengel混合物加入到预冷的6孔板中，并轻轻摇动培养板以确保混合物均匀地分布在培养板上；
b、将6孔板转移到37℃培养箱中进行过夜孵育（孵育1-2小时后即可使用，但过夜孵育的涂层更有利于细胞培养）；
c、使用前吸弃涂层上面的液体。
3.ES传代
（1）传代前准备好基质胶涂布的六孔板及含10μM Y-27632抑制剂的培养基；
（2）显微镜下观察ES细胞状态，在洁净工作台中吸弃旧培养基，用半培养基量的PBS冲洗后加入培养量一半体积的Acuutase（6孔板中加入0.5mL即可）；
（3）转移到37℃培养箱消化4分钟，或在显微镜下观察直到大部分细胞脱落；如果细胞仍然附着，轻轻拍打培养板3-5次，或者在培养箱中孵育适当延长消化时间（不超过15分钟）；
（4）倾斜培养板，将Accutase溶液沿培养层表面转移两次，分离结块并转移到离心管中；
（5）用DMEM/F12培养基冲洗培养层表面，并与管中的细胞溶液合并在一块；
（6）室温下300g 离心5分钟（残留的Accutase会干扰细胞的附着和下游应用，如果进行转染，应该尽量去除干净）；
（7）吸去上清，用含有10μM Y-27632抑制剂的培养基进行重悬；如果需要，可以用细胞计数器进行细胞计数并计算细胞铺板的体积和面积；
（8）将细胞加入涂层板中，轻轻摇动使细胞分布均匀；
（9）将培养板放入37℃培养箱中培养。
4.结果观察
（1）培养24h后换液，撤掉含抑制剂的培养基，换为正常培养基；
（2）换液后24h观察并拍照记录。
注意：MatrigengeL Matrix> 4℃时会逐渐聚合成胶，请严格把控操作温度，控制操作时间，稀释后的基质胶混合液同样需要冰上操作；板材可以在孵育一小时后使用，但过夜孵育的涂层可以使细胞产生较好的长期形态。
三.
实验结果
10×物镜下视野
4×物镜下视野
四.
结果分析
1.从细胞的克隆形成率以及克隆面积上看，用Brand C基质胶培养的ES细胞与用模基基质胶培养的效果相当。
2.两款基质胶均无细胞分化现象产生。
五.
关于模基基质胶
模基生物基质胶经过严格的质检验证，具备安全性高、浓度多样性、批次稳定性好、低内毒素、无污染的特点。在购买模基产品时，根据用户个性化的需求对用户进行最佳产品、货号的推荐，以便用户获得性价比最高、效果最优的产品。
进行ES细胞培养时推荐使用干细胞专用金牌基质胶，干细胞专用金牌基质胶是在低生长因子基质胶之上再次进行优化并附加多项测试的基质胶，去除干扰因子，更适合干细胞的生长以及后续添加因子和抑制剂的人为诱导分化。
六.
参考资料
