模基生物类器官消化液

产品描述

模基生物类器官传代消化液可应用于多种哺乳动物(如人、鼠、猪、蝙蝠、牛等)组织来源类器官的常规传代，可使类器官从基质胶中分离，并可使其温和地消化为小细胞簇或单细胞，同时保持其传代后的生长活力。

产品信息

其他自备试剂

其他自备耗材

类器官的传代消化

1.  待类器官培养到直径为100~500μm大小时（或变黑不再增大时），即可进行类器官的传代（每代约1~2周）。以下操作与细胞接触的耗材均需用润洗液润洗后使用：

2. 吸弃旧培养基，加入等体积上皮类器官基础培养基，用细胞刮刀或者移液管吸头尖端轻轻刮下（或吹打）基质胶和类器官混合物，转移至1.5mL离心管中（每管最多收集2~3孔类器官，避免体积体积过大消化效率低），吹打5~10次，使类器官和基质胶分离，300g离心3分钟。

3. 去除上清液加入5倍于基质胶和类器官混合物体积的类器官消化液，吹打混匀后置于37℃培养箱中消化5~10分钟。取出吹打混匀，取10μL混合液镜检是否消化成小的细胞团块，消化不充分可适当延长消化时间。若要求细胞计数则需消化成单个细胞，可延长消化时间至10~20分钟后终止消化后台盼蓝染色进行细胞计数。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。

4.  消化完成后，加入5倍体积上皮类器官基础培养基吹打混匀以终止消化反应，然后250g离心3分钟。

5. 吸弃上清液，用上皮类器官基础培养基清洗2次以去除残留的消化液。最后一次清洗可将类器官合并收集在同一个离心管中。

6. 清洗完成后将离心沉淀中的细胞进行传代培养，在细胞沉淀中加入基质胶（>70%）并在冰上混匀（注意，混匀吹打的动作要轻柔，切忌产生大量气泡，常温混匀则需要控制在15秒内），混匀后置于冰上。

注意：基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7. 将基质胶和细胞的混合悬液点入培养孔板底部正中央，使用枪头稍微摊平悬液，注意避免悬液接触孔板侧壁。（推荐：96孔板接种3~10μL/孔，48孔板接种10~20μL/孔，24孔板接种20~30μL/孔）。

注意：为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。

8. 将培养板放入37℃和5% CO2的培养箱中15-25分钟，让基质胶凝固。

9. 待基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入室温平衡的类器官完全培养基，避免破坏已凝固结构。（推荐：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏已凝固结构。

10. 将培养板置于37 ℃和5% CO2的恒温培养箱中。

11. 每隔2~3天更换一次培养基，小心地从孔中吸出培养基，并加入新鲜的室温平衡的类器官完全培养基。

12. 密切监测类器官生长状态，直到类器官需要进行下一步实验。