NeuroCortex Medium

NeuroCortex series 皮质脑成熟试剂盒

1、 产品描述

NeuroCortex series皮质脑类器官诱导试剂盒是模基生物自主研发的前脑腹侧化信号通路调控技术，专为模拟人脑皮质发育及功能研究设计的标准化培养体系。该体系通过时序激活Wnt/β-catenin及梯度抑制BMP/Smad信号，驱动人源多能干细胞（PSC）定向分化为高纯度谷氨酸能神经元（VGLUT1/2阳性率>85%），并同步诱导放射状胶质细胞（Pax6+/BLBP+）形成仿生脑室区结构。可在60天内稳定生成直径1.5-2.0 mm的层状皮质类器官，其特征性表达深层皮质标志物TBR1（第Ⅴ-Ⅵ层）及表层SATB2+神经元（第Ⅱ-Ⅳ层），并伴随MBP+/MOG+少突胶质细胞介导的致密髓鞘化（LFB染色阳性率>70%）。该体系通过三维旋转生物反应器或超低粘附孔板中（3D-RBC，氧梯度维持在8-12%）实现高通量培养（单批次≥96个类器官）。本模型适用于神经退行性疾病（如阿尔茨海默症tau蛋白病理建模）、精神分裂症NMDA受体功能解析及自闭症谱系障碍突触可塑性研究，同时兼容单细胞测序和钙成像动态追踪技术。

2、 产品信息

3、 其他自备材料和试剂

4、 模基生物推荐用细胞系

H1、H9、HN4、iPSCs帕金森患者来源DY043、iPSC-EGFP等

5、 新手须知

NeuroCortex series 脑类器官诱导试剂盒理论上可以形成至少100个脑类器官，但是建议第一次诱导以1个六孔板启动分化形成至少60-100个均一大小神经上皮球（理想形成率60%）。

注意事项：在使用时应始终穿戴防护服，在处理诸如人体细胞或其他生物及有害物质时应遵循安全的实验室规程。

仅用于科学研究。

6、 使用说明：皮质脑类器官诱导培养

a)      实验用品

基质胶、干细胞完全培养基、皮质脑类器官诱导培养基、超低黏附u底板/6孔培养皿其他类器官培养所需试剂、耗材。

b)     复苏hESC/iPSC（以6孔板为例）

当神经球中心及外周区域出现特征性黑色斑点状神经上皮莲座结构（Rosette structure，PAX6+/Nestin+双阳性神经前体细胞簇）时，提示神经外胚层扩张至成熟阶段，需终止神经莲座扩张培养基（Neural Rosette Expansion Medium）的使用。完全弃去原培养基，每孔加入2 mL皮质脑成熟培养基，转移至水平十字/旋转摇床（80 rpm/s）持续培养18-26天，每48-72小时全量换液。成熟类器官经免疫荧光染色验证可观察到TUJ1+神经元与SOX2+放射状胶质细胞形成脑室区（VZ）及亚脑室区（SVZ）层状结构，qPCR检测显示SLC17A6/VGLUT2等谷氨酸能标志基因表达量提升3-5倍。

当皮质类器官直径≥1.0 mm时，需执行机械分割以缓解内部营养扩散限制。使用无菌2号尖刃手术刀片沿冠状面将类器官切割为2-4块（组织块体积均一性CV<15%），经DPBS洗涤后采用宽口径移液枪头（内径1.5 mm）转移至15 mL锥形管静置沉降（5-8 min）。弃上清后加入含1×StemGrowth抗胁迫补充剂的神经莲座扩增培养基，接种于超低吸附六孔板（80 rpm/s），每日换液以清除切割应激产生的凋亡碎片（Annexin V+比例<5%）。4天后切换至皮质成熟培养基并提升摇床转速至120 rpm/s，通过增强培养基渗透效率（扩散系数提升40%）可将类器官活性维持至180天，期间TUNEL检测显示中心坏死区域占比稳定于<8%，同时突触素表达（Synaptophysin+ puncta密度>800/μm²）保持功能稳态。

V1.1版

更新时间：2025/06/23