MA-0817H009HL/S 模基生物小鼠肝胆管类器官培养基套装（扩增）

模基生物小鼠肝胆管类器官试剂盒（扩增）

产品描述

模基生物小鼠肝胆管类器官培养试剂盒（扩增）（Mouse Liver Ductal Organoid Kit，Expansion）是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和培养从成体干细胞衍生的小鼠肝胆管类器官。肝胆管的自我更新上皮细胞是由位于肝脏的干细胞及其祖细胞的扩增所驱动的。肝胆管类器官因其上皮在结构、细胞类型组成和自我更新动力学方面的表现，而具有真实器官的特征。肝胆管类器官可以在分化培养基中诱导出肝样细胞，为小鼠类肝脏发育和疾病的研究提供了前所未有的模型。

产品信息

其他自备材料和试剂

小鼠肝胆管类器官完全培养基的制备

在无菌工作台中配置小鼠肝胆管类器官完全培养基。在小鼠肝胆管类器官扩增培养基中生长的类器官主要由胆管细胞组成。下面以制备10ml的扩增培养基和维持培养基为例。如果需配置其他体积，请进行相应比例进行调整。

1.冰上解冻小鼠肝胆管类器官培养因子B(50X) (扩增)、小鼠肝胆管类器官培养因子C(250X)(扩增)，充分混匀。

注意：一旦解冻，立即使用或冷藏，并在-20°C储存不超过10个月，避免反复冻融。

2.小鼠肝管类器官扩增培养基配制：在10ml小鼠肝胆管类器官基础培养基中依次加入200μL小鼠肝胆管类器官培养因子B(50X) (扩增)、40μL小鼠肝胆管类器官培养因子C(250X)(扩增)，充分混匀。

注意：配制完成后的培养基在2-8°C下保存不超过2周。小鼠肝胆管类器官细胞因子B (扩增) 含有细菌和真菌抗生素(50X)。

小鼠肝胆管类器官的建立与传代培养

Ø 原代小鼠肝胆管类器官的建立

1.用50或15ml离心管在预冷的原代组织保存液中收集原代小鼠肝组织片。将组织样品保持在4°C，直到开始分离。

2. 评估获得的组织片是否纯粹由上皮组成，或者是否也含有脂肪或肌肉组织。如果是，在解剖显微镜下，尽可能使用手术剪刀或手术刀和镊子去除非上皮成分。如果没有脂肪或肌肉组织存在，立即继续下一步。

3. 用上皮类器官基础培养基或DPBS冲洗肝组织，直到上清清澈。

4. 将基质胶在冰面上解冻并保持低温。

5. 在细胞培养皿中，用外科剪刀或手术刀将组织切成5 mm³的小碎片。解剖的样品必须足够小，能够通过10ml移液管的尖端。

6. 将胃组织样本放入15ml离心管中，管内含有10ml预冷的上皮类器官基础培养基 (含1% FBS)。

7. 用10ml移液器上下吹打至少10次，清洗样品。在接下来的步骤中，使用前在移液管头的内表面涂上抗粘附冲洗液，以避免样品粘附在移液管壁上。

8. 让试管静止，直到样品沉淀在底部。用10ml移液管抽吸上清，加入10ml预热组织消化液。

9. 在37℃下以100转/分的转速消化肝组织。消化时间不应超过30分钟。为防止消化过度，应在显微镜下检查消化过程中是否出现胆管结构。

10. 一旦胆管结构出现，通过添加2%FBS停止消化，然后轻轻地上下吹打。

11. 静置1-2分钟，将上清液移入新管。

12. 加入10mL上皮类器官基础培养基，再次重复步骤11。

13. 在4°C下，300g旋转上清3分钟。抽吸并丢弃上清。

14. 用10mL上皮类器官基础培养基重新悬浮组织，在4°C下，300g离心3分钟。

15. 重复步骤14两次。

16. 抽吸上清液，在基质胶中重悬微球。基质胶应冰冻保存，防止其凝固;因此，工作要迅速。基质胶的量取决于颗粒的大小。大约每25 μL的基质胶含有20-100个胆管结构。切勿过多稀释基质胶 (基质胶浓度应大于70%)，以确保形成固体胶滴。

17. 在24孔细胞培养板的底部，将含类器官的基质胶滴在孔中心周围约30 μL的液滴中。一旦类器官在基质胶中重悬，尽快进行接种，因为基质胶可能会在管或移液器尖端凝固。不要让基质胶接触孔壁。

18. 将培养板放入37°C和5%CO2的培养箱中15-25分钟，使基质胶凝固。

19. 准备所需量的小鼠肝胆管类器官培养基。基质胶液滴凝固后(15- 25min)，打开平板，每孔小心地加入500 μL 完全培养基。不要直接将培养基添加到基质胶液滴的顶部，因为这可能会破坏液滴。

21. 将培养板置于37°C和5% CO2的培养箱中。

22. 每3天更换一次培养基，小心地从孔中抽吸培养基，并用新鲜的、预热的小鼠肝胆管类器官培养基代替。密切监测类器官的形成。理想情况下，小鼠肝胆管类器官第一次传代应在5至8天之间