模基生物子宫人内膜癌类器官试剂盒

产品描述

模基生物人子宫内膜癌类器官试剂盒（Human Endometrial Cancer Organoid Kit）是一种化学定义的细胞培养基，用于建立和维护人子宫内膜癌类器官。病人来源的肿瘤类器官概括了原始肿瘤的基因组和病理特征，因此在医学研究和精确医学中具有巨大的前景。

产品信息

其他自备材料和试剂

子宫内膜癌类器官完全培养基的制备

使用无菌操作技术配制子宫内膜癌类器官完全培养基。以下是配制 10mL 完全培养基的示例，如所需量不同，可相应调整用量。

1. 冰上解冻子宫内膜癌类器官培养因子 B (50x)和子宫内膜癌类器官培养因子 C(250x)。

注意： 解冻后，建议将子宫内膜癌类器官培养因子 B (50x)和子宫内膜癌类器官培养因子 C(250x)分别分装后保存取用，避免反复冻融。

2. 将 200uL 子宫内膜癌类器官培养因子 B (50x)，40uL 子宫内膜癌类器官培养因子 C(250x) 加至 9.76mL 子宫内膜癌类器官培养基础培养基中，充分混合，配制成 10mL 子宫内膜癌类器官完全培养基。

注意：配制后的子宫内膜癌类器官完全培养基可在 2-8°C 储存，建议在两周内使用。子宫内膜癌类器官培养因子

B (50x)内含有细菌及真菌抗生素。

病人来源的子宫内膜癌类器官的原代培养

注意：涉及主要人体组织材料的研究必须遵循所有相关的机构和政府法规。在收集主要人体组织材料之前，必须获得所有受试者的知情同意。

Ø 原代子宫内膜癌类器官的建立

1. 用离心管将原发性子宫内膜癌组织碎片收集在冰冷的原发组织储存溶液中。将组织样品保持在 4℃，直到分离开始。

2. 评估获得的组织碎片是否完全由上皮组成。如果存在脂肪或肌肉组织，请在解剖显微镜下使用手术剪刀或手术刀和镊子尽可能多地去除这些非上皮成分。如果没有脂肪或肌肉组织，请立即继续下一步。

3. 用子宫内膜癌类器官基础培养基或 DPBS 冲洗组织两次。

4. 使用手术剪刀或手术刀将组织切碎成 1-3 mm3 的小碎片，置于细胞培养皿中。

5. 在 37℃下用 10mL 肿瘤组织消化溶液在 15mL 离心管中消化组织片段，消化时间可变，从 30 分钟到 1.5 小时不等。仔细监测消化过程，可适当吹打取上清观察消化程度。当大多数组织片段能够通过 1mL 移液器吸头时，消化过程即完成。

6. 将 FBS 加入组织消化混合物中，最终浓度为 2%，并使用 100μm 细胞过滤器过滤。

7. 收集并在 4°C 下以 250g 离心过滤的细胞 3 分钟。 在可见的红色沉淀的情况下，吸入上清液，并使用 2mL

红细胞裂解液重悬沉淀，在室温下裂解红细胞 1 分钟，并在 4°C 下以 250g 离心 3 分钟。

8. 吸出上清液并将沉淀重悬于基础培养基中，在 4°C 下以 250g 离心 3 分钟，再次重复此步骤。

9. 吸出上清液并将沉淀重悬于基质胶中。基质胶应保存在冰上以防止其凝固。尽快进行该过程。使用的基质胶的量取决于颗粒的大小。大约 10，000 个细胞应接种在 25 μ L 基质胶中。

10. 不要过度稀释基质胶（基质胶应>70%（基质胶体积/总体积）），因为这可能会抑制固体液滴的正确形成。将含有类器官的基质胶铺在 24孔细胞培养板的底部，每个液滴围绕孔中心约 30 μL。

关键：一旦类器官重悬于基质胶中，尽快进行种板，因为基质胶可能会在试管或移液器吸头中凝固。不要让基质颗粒接触管壁。

11. 将培养板放入 37°C 和 5% CO2 的培养箱中 15-25 分钟，让基质凝胶固化。

12. 准备所需量的子宫内膜癌类器官完全培养基。