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MA-0807T08L/S 模基生物胃癌类器官培养基套装

    模基生物胃癌类器官培养基套装是一种化学定义的细胞培养基,胃癌类器官试剂盒是一种化学定义的细胞培养基,用于建立和维持人类胃癌类器官。由此建立的病人源性癌症器官概括了基因组和原始肿瘤的病理特征,因此对医学研究和精准医疗有很大的应用前景

    官方指导价:MA-0807T008L(¥12081)

                         MA-0807T008S(¥4228)

产品详情

product details

模基生物人胃癌类器官试剂盒

产品描述

模基生物人胃癌类器官试剂盒(Human Gastric Cancer Organoid Kit)是一种化学定义的细胞培养基,用于建立和维持胃癌类器官病人来源的肿瘤类器官概括了原始肿瘤的基因组和病理特征,因此在医学研究和精确医学中具有巨大的前景。

产品信息

产品名称

产品货号

试剂盒组分

规格

试剂盒组分货号

人胃癌类器官培养基套装

MA-0807T008L

胃癌类器官基础培养基

500 mL

MG2179-GC-A500

胃癌类器官培养因子B (50x)

10 mL

MG2179-GC-B500

胃癌类器官培养因子C (250x)

2mL

MG2179-GC-C500

MA-0807T008S

胃癌类器官基础培养基

100mL

MG2179-GC-A100

胃癌类器官培养因子B (50x)

2mL

MG2179-GC-B100

胃癌类器官培养因子C (250x)

0.4mL

MG2179-GC-C100

其他自备材料和试剂

产品名称

产品货号

模基生物金牌基质胶

082701/082703/082755

上皮类器官基础培养基

MB-0818L07

类器官培养润洗液

MB-0818L03L/S

肿瘤组织消化液

MB-0818L05L

模基生物基质胶分装预冷盒

AB-YL1005

红细胞裂解液

MB-0818L08L/S

活组织细胞保存液

MB-0818L04L

Fetal Bovine Serum (FBS)

-

DPBS (1X), 液体,不含钙和镁

-

100 μm细胞滤网

-

胃癌类器官完全培养基的制备

使用无菌操作技术配制胃癌类器官完全培养基。以下是配制 10mL 完全培养基的示例,如所需量不同,可相应调整用量

1. 冰上解冻胃癌类器官培养因子B (50x)和胃癌类器官培养因子C(250x)

注意: 解冻后,建议将胃癌类器官培养因子B (50x)和胃癌类器官培养因子C(250x)分别分装后保存取用,避免反复冻融。

2.  200uL胃癌类器官培养因子B (50x)40uL 胃癌类器官培养因子C(250x) 加至9.76mL胃癌类器官培养基础培养基中,充分混合,配制成 10mL胃癌类器官完全培养基。

注意:配制后的胃癌类器官完全培养基可在 2-8°C 储存,建议在两周内使用。胃癌类器官培养因子B (50x)内含有细菌及真菌抗生素。

病人来源的胃癌类器官的原代培养

注意:涉及主要人体组织材料的研究必须遵循所有相关的机构和政府法规。在收集主要人体组织材料之前,必须获得所有受试者的知情同意。

Ø 原代人胃癌类器官的建立

1.用离心管将原发性胃癌类组织碎片收集在冰冷的原发组织储存溶液中。将组织样品保持在4,直到分离开始。

2.评估获得的组织碎片是否完全由上皮组成。 如果存在脂肪或肌肉组织,请在解剖显微镜下使用手术剪刀或手术刀和镊子尽可能多地去除这些非上皮成分。如果没有脂肪或肌肉组织,请立即继续下一步。

3.用胃癌类器官基础培养基或DPBS冲洗组织两次。

4.使用手术剪刀或手术刀将组织切碎成1-3 mm3的小碎片,置于细胞培养皿中。

5.37下用10mL肿瘤组织消化溶液在15mL离心管中消化组织片段,消化时间可变,从30分钟到1.5小时不等。仔细监测消化过程,可适当吹打取上清观察消化程度。当大多数组织片段能够通过1mL移液器吸头时,消化过程即完成。

6.FBS加入组织消化混合物中,最终浓度为2%,并使用100μm细胞过滤器过滤。

7.收集并在4°C下以250g离心过滤的细胞3分钟。  在可见的红色沉淀的情况下,吸入上清液,并使用2mL红细胞裂解液重悬沉淀,在室温下裂解红细胞1分钟,并在4°C下以250g离心3分钟。

8.吸出上清液并将沉淀重悬于基础培养基中,在4°C下以250g离心3分钟,再次重复此步骤。

9.吸出上清液并将沉淀重悬于基质胶中。基质胶应保存在冰上以防止其凝固。尽快进行该过程。使用的基质胶的量取决于颗粒的大小。大约10000个细胞应接种在25 μ L基质胶中。

10.不要过度稀释基质胶(基质胶比例应>70%(基质胶体积/总体积)),因为这可能会抑制固体液滴的正确形成。将含有类器官的基质胶铺在24孔细胞培养板的底部,每个液滴围绕孔中心约30 μL

注意:一旦类器官重悬于基质胶中,尽快进行种板,因为基质胶可能会在试管或移液器吸头中凝固。不要让基质颗粒接触管壁。

11.将培养板放入37°C5% CO2的培养箱中15-25分钟,让基质凝胶固化。

12.准备所需量的胃癌类器官完全培养基。

13.一旦基质胶滴凝固(15-25分钟),打开板并小心地向每个孔中加入500 μL胃癌类器官完全培养基。

注意:不要将培养基直接添加到基质胶液滴的顶部,因为这可能会破坏已凝固结构。

14.将培养板置于37 ℃和5% CO2的恒温培养箱中。

15.每隔3-4天更换一次培养基,小心地从孔中吸出培养基,并用新鲜的预热的类器官完全培养基代替它。

16.密切监测类器官生长状态,理想情况下,胃癌类器官应在 7-10 天内建成。

Ø 人胃癌类器官的传代培养

1. 用经过润洗液润洗的枪头吹打刮取类器官,并将类器官和培养基的悬液转移至经过润洗液润洗的 1.5 mL EP 管中。

2. 用经过润洗液润洗的枪头用力重悬类器官悬浮液,使得类器官与基质胶分离。

3. 250g 离心力室温离心 3 min

4.弃上清,使用类器官消化液或用机械破坏。对于使用类器官消化液的细胞解离,在类器官消化液中重悬类器官悬浮液,移液器反复上下吹打并置于37°C孵育,直至类器官解离。使用带滤芯枪头每2分钟反复上下吹吸8次,以帮助类器官解离。密切监视消化过程使在类器官解离液中的孵育时间最短。如发生机械故障,在1.5 mL上皮类器官基础培养基中重悬类器官悬液。小心地用移液管吸取类器官悬浮液,反复上下30次,这将有助于消化。

注意:不要在类器官解离液中解离超过7分钟,因为这可能会导致较差的类器官的生长甚至破坏。根据经验,如果是小块细胞的混合物,可以观察到由10-50个细胞组成的细胞团,消化就完成了。

5. 消化完成后,用1ml上皮类器官基础培养基进行一次冲洗,然后室温下250g离心3分钟。

6. 弃上清,用适量的基质胶重悬类器官沉淀,重悬后置于冰上,重悬时间不超过 30s 以避免基质胶过早凝固。

注意:基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养过程中基质胶的结构稳定性。

7. 将基质胶和类器官的混合悬液点入 24孔板底部正中央,避免悬液接触孔板侧壁,每孔 30 uL 左右。

注意:为防止基质胶室温凝固,此步骤应尽快完成。

8. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中,孵育 15min 左右待基质胶凝固。

9. 配制胃癌类器官完全培养基。

10. 待基质胶完全凝固后,加入已配制好的人胃癌类器官完全培养基,24孔板每孔加入500 uL完全培养基。

11.  24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养,直到类器官需要进一步的实验。

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